2015版藥典關(guān)于蜂蜜相關(guān)測定的液相色譜解決方案

點(diǎn)擊次數(shù)：6716 更新時(shí)間：2017-02-22

為了對應(yīng)2015版藥典——蜂蜜相關(guān)測定，德世科技為您解析液相色譜法檢測蜂蜜中各種成分的方法所用儀器耗材。可以幫助廣大藥物分析者特別是各藥檢所中藥室、中藥企業(yè)解決在分析檢測蜂蜜中遇到的問題。

2015 版《中國藥典》一部中規(guī)定了蜂蜜中寡糖、5-羥甲基糠醛、及營養(yǎng)成分果糖、葡萄糖的測定。對余這三項(xiàng)的測定說明如下：

一寡糖的測定--目前市場出現(xiàn)的假蜂蜜中常添加大量糖漿，含有較多寡糖成分。通過檢測蜂蜜樣品是否出現(xiàn)寡糖，能快速鑒定摻假蜂蜜。藥典規(guī)定寡糖的測定采用薄層色譜法，前處理需要用一種特殊的固相萃取小柱，德世科技現(xiàn)已可為客戶提供成品固相萃取小柱5010-SPE6252-AC SpecialSPE Column Oligosaccharides in honey，200mg 硅藻土/500mg 活性碳/200mg 硅藻土/6ml，30/p，*藥典要求。

二 5-羥甲基糠醛--羥甲基糠醛是衡量蜂蜜新鮮度的一項(xiàng)重要指標(biāo)，其含量越少，表明蜂蜜越新鮮。蜂蜜貯存和加工過程中溫度越高，時(shí)間越長，產(chǎn)生的羥甲基糠醛就越多，它的含量高，標(biāo)志蜂蜜貯存環(huán)境或加工工藝不合理，或者蜂蜜中有摻假。 5-羥甲基糠醛極性較大，適合用液相色譜柱 5020-89731 InertSustain AQ-C18 5um，4.6*250mm 分析。

三果糖、葡萄糖—為蜂蜜中的營養(yǎng)成分。藥典中推薦使用Prevail Carbohyrate ES 色譜柱，此為聚合物基質(zhì)氨基液相色譜柱

2015 版藥典中對以上三項(xiàng)規(guī)定的測定方法如下：

【檢查】

寡糖

取本品2g，置燒杯中，加入10ml 水溶解后，緩緩加至活性炭固相萃取柱（在固相萃取空柱管底部**一個(gè)篩板，壓緊，置固相萃取裝置上。稱取硅藻土0.2g，加水適量混勻，用吸管加至固相萃取柱管中，自然沉降形成3μm 厚的硅藻土層，打開真空泵吸引，稱取活性炭0.5g 加10ml 水?dāng)嚢瑁靹颍梦芗尤耄谡婵毡玫奈率够钚蕴砍两担?dāng)水面接近活性炭層面時(shí)，再次注入0.2g 用水混勻的硅藻土（蜂蜜中寡糖測定固相萃取小柱：5010-SPE6252-ACSpecial SPE Column Oligosaccharides in honey，200mg 硅藻土/500mg 活性碳/200mg 硅藻土/6ml，30/p），在真空泵的吸引下，以1 秒/滴的速度用25ml的水預(yù)洗，當(dāng)液面到達(dá)柱面上2μm 時(shí)關(guān)掉**，再壓入上篩板，備用）中，打開**，在真空泵的吸引下，使

溶液通過柱子，待液面下降到柱面以上2μm 時(shí)，用7%乙醇25ml 洗脫，棄去洗脫液。再用50%乙醇l0ml 洗脫，收集洗脫液，置65℃水浴中減壓濃縮至干，殘?jiān)?0%乙醇1ml 使溶解，作為供試品溶液。另取麥芽五糖對照品，加30%乙醇制成每1ml 含1mg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0512）試驗(yàn)，吸取供試品溶液與對照品溶液各3ml，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以正丙醇-水-三乙胺（60：30：0.7）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以苯胺-二苯胺-磷酸的混合溶液（取二苯胺1g，苯胺1ml，磷酸5ml，加丙醇至50ml，混勻），加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應(yīng)位置的下方，應(yīng)不得顯斑點(diǎn)。

5-羥甲基糠醛 照液相色譜法（通則0512）測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（液相色譜柱：5020-89731 InertSustainAQ-C18 5um，4.6*250mm）；以乙腈-0.1%甲酸溶液（5：95）為流動(dòng)相；5-羥甲基糠醛檢測波長為284nm，鳥苷檢測波長為254nm。理論板數(shù)按鳥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備取鳥苷對照品適量，精密稱定，加10%甲醇制成每1ml 含鳥苷0.2mg 的溶液，即得。另取5-羥甲基糠醛對照品適量，加10%甲醇制成每1ml 含4μg 的溶液，作為定位用。供試品溶液的制備取本品1g，置燒杯中，精密稱定，加10%甲醇適量溶解，并分次轉(zhuǎn)移至50ml 量瓶中，精密加入鳥苷對照品溶液1ml，加10%甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定；另取鳥苷對照品溶液，5-羥甲基糠醛對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用以確定供試品色譜中5-羥甲基糠醛及鳥苷的色譜峰；以鳥苷對照品計(jì)算含量并乘以校正因子0.340 進(jìn)行校正，即得。本品含5-羥甲基糠醛，不得過0.004%。蔗糖和麥芽糖照〔含量測定〕項(xiàng)下方法測定，分別計(jì)算含量。本品含蔗糖和麥芽糖分別不得過5.0%。

液相色譜儀配置

P230II梯度HPLC系統(tǒng) 北京德世科技

單系統(tǒng)基本配置：

⑴ P230II高壓恒流輸液泵

⑵ UV230II型紫外可變波長檢測器

⑶ Rheodyne 7725i 高壓六通進(jìn)樣閥

⑷ ZJ-1閥及色譜柱支架

⑸ TD-1-15梯度混合器

⑺ EC2006色譜處理系統(tǒng)軟件（不含打印機(jī)、計(jì)算機(jī)）

⑻ P230II梯度系統(tǒng)啟動(dòng)包

【果糖、葡萄糖含量測定】照液相色譜法（通則0512）測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以Prevail Carbohyrate ES（聚合物基質(zhì)液相色譜柱：SHO-F7630001 Asahipak NH2P-50 4E 250MMx4.6MM）為色譜柱，以乙腈-水（75：25）為流動(dòng)相；示差折光檢測器檢測。理論板數(shù)按果糖峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密稱取果糖對照品1.0g，葡萄糖對照品0.8g，置同一具塞錐形瓶中，精密加入40%乙腈20ml，溶解，搖勻，作為果糖、葡萄糖對照品儲(chǔ)備液。另精密稱取蔗糖對照品0.2g，麥芽糖對照品0.2g，置同一具塞錐形瓶中，精密加入40%乙腈10ml，溶解，搖勻，作為蔗糖、麥芽糖對照品儲(chǔ)備液。分別精密量取果糖、葡萄糖對照品儲(chǔ)備液和蔗糖、麥芽糖對照品儲(chǔ)備液，加40%乙腈配成不同濃度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖混合對照品溶液。每一濃度溶液配制中，儲(chǔ)備液的用量和稀釋體積見2015 版藥典P360。精密吸取混合對照品溶液各15μl，注入液相色譜儀，分別測定。以對照品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積值為縱

坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。供試品溶液的制備取本品約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40%乙腈20ml，溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法精密量取供試品溶液15μl，注入液相色譜儀，測定，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。

本品含果糖（C6H12O6）和葡萄糖（C6H12O6）的總量不得少于60.0%，果糖與葡萄糖含量比值不得小于1.0。

液相色譜儀配置

P230II高壓恒流泵北京德世科技

1）雙柱塞往復(fù)串聯(lián)泵

2）流量范圍：0.001mL/min-9.999mL/min, 設(shè)定步長：0.001mL/min

3）流量準(zhǔn)確度：≤±0.3% (1.000ml/min, H2O,室溫,8.5MPa)

4）流量穩(wěn)定性：RSD≤0.1% (1.000ml/min, H2O,室溫,8.5MPa)

5）高工作壓力：42MPa(0.001mL/min—5.000mL/min)

20MPa(5.001mL/min—9.999mL/min)

6）顯示壓力誤差：≤±3.0%

7）壓力脈動(dòng)：≤1.0%

8）電源：AC 110V/220V, 50Hz/60Hz

9）功耗：180W

10）外形尺寸（長×寬×高）：420mm×280mm×175mm

11）流量準(zhǔn)確度校正

12）內(nèi)外控互換模式

13） Psi,Mpa,bar壓力單位顯示任選

RI-201H示差折光檢測器（*）

Rheodyne7725i高壓進(jìn)樣閥

A/D適配器

ZJ-1閥及色譜柱安裝支架

P230配RI-201H示差折光檢測器啟動(dòng)包

所用耗材

測定項(xiàng)目	所用耗材及裝置
檢查項(xiàng)：寡糖	蜂蜜中寡糖測定小柱	5010-SPE6252-AC	Special SPE Column Oligosaccharides in honey）,200mg硅藻土/500mg活性碳/200mg硅藻土/6ml，30/p
	固相萃取裝置	5010-50000	GL-SPE VACUUM MANIFOLD KIT 固相萃取裝置
	固相萃取裝置止回閥	5010-60010	LURE STOP VALVE PTFE 12EA 止回閥
	測定	薄層色譜法
檢查項(xiàng)：5-羥甲基糠醛	液相色譜柱	5020-89731	InertSustain AQ-C18 5um，4.6*250mm
含量測定項(xiàng)：果糖葡萄糖	液相色譜柱	SHO-F7630001	Asahipak NH2P-50 4E 250MMx4.6MM
其他通用耗材	針式過濾器	8810-11322	WondaDisc水系針頭濾器,13*0.22um,100pk
	針式過濾器	8810-21322	WondaDisc有機(jī)系針頭濾器,13*0.22um,100pk
	樣品瓶	8110-20923	9mm瓶口，2ml 透明螺旋口樣品瓶（WondaBox包裝，帶標(biāo)簽） 100/p
	樣品瓶蓋+墊	8110-92291	9mm平墊+蓋預(yù)切割 100/p