MVE液氮罐超低溫保存方法詳述

點擊次數：2730 更新時間：2019-06-06

微生物都可以用超低溫來保管，超低溫保管法是適用范圍廣泛的微生物保管法。需求雜亂養分的微生物種，如用其他的儲存辦法不能堅持其生機（如植物的病原性真菌），一般可用超低溫的辦法保管（ ATCC1983；Halliday ， Baker1985）。MVE液氮罐

此法是將凍存在小管或安瓿里的細胞以較慢的冷凍速率（1℃／分鐘）冷凍，直至—150℃，再將這些小管儲存在—150～－196℃的液氮中。超低溫的冷凍保護劑不同于凍干法所用的冷凍劑。ATCC 常用一種由甘油（10％）、二甲亞砜（5％）和培養液制成的混合劑保管大都的細胞株。

液氮罐超低溫保存方法詳述

這些化學試劑進入細胞內可防止內膜的冷凍損傷。儲存在低溫容器內的細胞復蘇時有必要當心操作。當小管被加熱時，所構成的冰晶會將細胞殺死，正確操作就可防止這種事端。只需敏捷將樣品凍結就能削減生機的丟掉，做法是：將封口的小管敏捷放入 37℃的水中，直至一切的冰消融，然后翻開管口，將內容物移入培養基。超低溫保藏的微生物有必要一直儲存在溫度十分低的環境中，因而需求液氮罐。在長時間儲存的過程中有必要常常注意彌補液氮。

這種儲存辦法比凍干法需求更多的經費，包含為了保持儲存溫度所必要的勞動力和液氮等。

1 資料病毒超低溫保管所需資料有：熱收縮塑料管（NuncCryoflex），液氮罐，防護手套和面罩，記號筆，氣體噴燈，裝液氮的保溫瓶。

2 辦法
（1）剪一段兩頭各超出冷凍管長度 2cm 的熱收縮塑料管。
（2）將富含弄清病毒懸液（安排培養的上清培養基，或安排培養基內的細胞溶解產品均可）冰浴幾分鐘，用滅菌移液管將 0.2ml 冰浴過的上清懸液分裝到冷凍管內，并將蓋子擰緊。
（3）將有病毒的冷凍管放入熱收縮塑料管中部，刺進正確的標簽。
（4）用噴燈當心加熱熱收縮塑料管，并使之包住冷凍管。注意不要用太高的溫度加熱熱收縮塑料管。
（5）再當心加熱熱收縮塑料管的兩頭，用大號鑷子夾緊管的端口至*密封。
（6）將密封好的冷凍管疾速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍（操作時需求戴面罩和手套）。
（7）將冷凍過的冷凍管放入液氮罐中的格子內，一起記載樣品的具體的存放方位、試驗編號和寄存日期等。
（8）需求用時，敏捷從液氮罐內取出所需樣品，并投入 37℃水浴箱中凍結后，用解剖刀片在冷凍管的硅化墊圈處切開熱收縮塑料管。擰開冷凍管的蓋子時不需求除掉熱收縮塑料管。MVE液氮罐